В роли главных героев выступают 4 новых персонажа, известных нам по предыдущим частям Borderlands. Среди них:

• Афина (англ. Athena The Gladiator), знакомая нам по дополнению The Secret Armory of General Knoxx к Borderlands. Активный навык называется Кинетический Аспис. Она специализируется на ближнем бою и использовании особого кинетического щита. При активации активного навыка щит Афины поглощает весь входящий фронтальный урон, а по истечении времени действия навыка Афина бросает щит во врагов, высвобождая весь поглощенный урон.

• Вильгельм (англ. Wilhelm the Enforcer), один из сюжетных боссов в Borderlands 2, но пока не превращённый в киборга. Активный навык называется Волк и Святоша. Он проявляет себя во владении тяжелым огнестрельным оружием находящимся у него за спиной и использовании беспилотных дронов—помощников, которые будут защищать его (Святоша) и помогать убивать противников (Волк);

• Ниша (англ. Nisha The Lawbringer), которая в Borderlands 2 была известна как Шериф Линчвуда и девушка Красавчика Джека. Активный навык называется Дуэль. Этот навык позволяет в течение короткого времени вести огонь в режиме автонаведения со всеми повышенными параметрами стрельбы.

• Железяка (англ. Claptrap the Fragtrap) — новый вид боевого Гиперионского робота из линейки железяк. Активный навык называется VaultHunter.exe. При его активации робот сначала анализирует окружающую обстановку, а после, в зависимости от ситуации, запускает тот или иной активный навык, которых у Железяки достаточно много.